Mestre Splinter, nascido Hamato Yoshi, é um japonês de meia-idade, na casa dos cinquenta. Após ser exposto a uma substância mutagênica, transformou-se em um rato mutante. Ele tem uma estatura alta, com orelhas grandes, uma cauda longa e pelagem em vários tons de preto, marrom e branco. Ele veste um robe cor de ameixa. Tem quatro filhos, que são tartarugas ninja mutantes: Leonardo, Michelangelo, Raphael e Donatello. Splinter é um mestre ninja e sensei, tentando descobrir o que fazer a seguir agora que seus filhos cresceram e estão seguindo caminhos diferentes.